国产嫖妓一区二区三区无码,一本大道东京热无码视频,好吊色欧美一区二区三区视频,国产精品国产三级区别第一集

當(dāng)前位置:
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)ELISA法
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
技術(shù)支持Article
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)ELISA法
點(diǎn)擊次數(shù):1634 更新時(shí)間:2019-06-30

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)ELISA法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是分子生物學(xué)技術(shù)中檢測(cè)DNA靈敏的方法之一,而酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)是免疫學(xué)中敏感和特異的檢測(cè)方法的代表。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)ELISA法(PCR-ELISA)集上述兩方法之精髓,成為繼PCR之后又一個(gè)靈敏性更高、特異性更強(qiáng)、省時(shí)易行的新方法[7]。根據(jù)生物素和地谷新標(biāo)記底物的不同,PCR-ELISA主要分為兩大類:類為用生物素和地谷新同時(shí)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記;第二類則是分別對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和核酸雜交探針進(jìn)行標(biāo)記。

生物素和地谷新同時(shí)標(biāo)記PCR產(chǎn)物主要有三種途徑:①在PCR反應(yīng)混合物中同時(shí)加入生物素和地谷新標(biāo)記的脫氧核苷酸類似物(DIG-Bio-dUTP);②加入生物素化的引物和DIG-dUTP;③加入生物素化引物1和地谷新標(biāo)記的引物2。實(shí)驗(yàn)方法如下:將標(biāo)記的PCR產(chǎn)物用乙醇沉淀,或用純化柱除去未結(jié)合的標(biāo)記物,加至親合素包被的酶標(biāo)板孔中孵育1~2h,*洗滌,加抗地谷新抗體,然后加入堿性磷酸酶結(jié)合物底物孵育,終止反應(yīng)后,根據(jù)吸光度(A)值判斷結(jié)果。這類親合素介導(dǎo)的固相捕獲生物素標(biāo)記的靶分子檢測(cè)系統(tǒng),靈敏度高于PCR檢測(cè),且操作簡(jiǎn)便、快速,重復(fù)應(yīng)用性好,可以在短時(shí)間內(nèi)(<4h)準(zhǔn)確檢測(cè)大量的臨床標(biāo)本(血清、分泌液或甲醛固定標(biāo)本);通過(guò)適當(dāng)調(diào)整PCR循環(huán)次數(shù)及相關(guān)參數(shù)并對(duì)多時(shí)間點(diǎn)上產(chǎn)量進(jìn)行線性分析,可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。由于檢測(cè)系統(tǒng)是建立在雙標(biāo)記核酸片段上的,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)非特異性PCR產(chǎn)物吸附,引起本底偏高的現(xiàn)象。

第二類PCR-ELISA為生物素和地谷新分別標(biāo)記PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和核苷酸探針。用生物素化的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后加入親和素包被的酶標(biāo)板中,冰浴1h,經(jīng)洗滌后加入變性劑(50mmol/L NaOH)室溫作用數(shù)分鐘,加入雜交液和地谷新標(biāo)記的探針,雜交完成經(jīng)洗滌后加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗地谷新抗體,室溫下作用1h經(jīng)充分洗滌后加顯色劑,讀取A值。該方法利用生物素化引物獲得含生物素的PCR產(chǎn)物,使產(chǎn)物能與包被在酶標(biāo)板上的親和素牢固地結(jié)合,使特異性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物吸附于酶標(biāo)板上,繼而用地谷新標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交和放大,這一方法特異性強(qiáng),靈敏度高,重復(fù)性好。

PCR-ELISA方法的*性主要表現(xiàn)在以下四個(gè)方面。①利用生物素-親和素系統(tǒng)的強(qiáng)大親和能力,其親和常數(shù)K約為抗原抗體的104~107倍,為A蛋白(SPA)對(duì)IgF。的108倍。生物素和親和素二者高度特異的快速結(jié)合,不易受外界干擾,復(fù)合物十分穩(wěn)定,極少發(fā)生離解,提高了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性,縮短了反應(yīng)時(shí)間。此外,親和素不含糖基,等電點(diǎn)為pH=6.0,與其他抗原或抗體包被酶標(biāo)板比較,其非特異性吸附顯著減少,靈敏度得到提高。②PCR擴(kuò)增使陽(yáng)性信號(hào)通過(guò)擴(kuò)增本身以及地谷新抗原抗體反應(yīng)得到極大程度的放大,從而使檢測(cè)的靈敏度進(jìn)一步提高。③PCR-ELISA中尿嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)移酶的使用,使PCR技術(shù)中交叉污染得以極大程度的控制而不影響檢測(cè)效果,基本克服了PCR雜交技術(shù)中由于污染造成的假陽(yáng)性問(wèn)題。④標(biāo)記探針的使用,使檢測(cè)的特異性進(jìn)一步提高,可以與放射性標(biāo)記的Southern雜交相媲美,且探針的引進(jìn)使其應(yīng)用的范圍增大,比PCR本身在基因多態(tài)性分析、病毒分型、克隆鑒定等方面顯示了其*的優(yōu)勢(shì)。另外,非同位素標(biāo)記系統(tǒng)的應(yīng)用又避免了使用同位素帶來(lái)的危害,而且整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期較Southern雜交明顯縮短(約 6h),并且操作簡(jiǎn)便,可用于大批量標(biāo)本的同時(shí)檢測(cè)。當(dāng)然PCR-ELISA方法的建立有一定的要求,其中PCR產(chǎn)物和探針的雜交條件(PCR產(chǎn)物的稀釋度、雜交溫度和時(shí)間)與檢測(cè)敏感性、特異性有密切關(guān)系。

歡迎購(gòu)買本公司ELISA試劑盒,*期間有精美禮品贈(zèng)送還可以享受免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。您只需要把標(biāo)本寄給我們,一星期左右就可以出實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

 

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

国产亚洲精品精华液| 99热精品久久只有精品| 男朋友舌头伸进去添好爽视频| 两个人看的www在线观看| 日日摸天天碰中文字幕你懂的| 17岁日本高清免费观看完整版 | 免费人成激情视频在线观看冫| 亚洲色欲综合一区二区三区| 亚洲一区二区三区无码国产| 金瓶梅1-5集观看完整版 | 国产乱色精品成人免费视频| 又湿又紧又大又爽又A视频| 亚洲AV日韩精品久久久久久久| 人善交videos欧美3d| 少妇看a片偷人精品视频| 亚洲精品无码久久久久秋霞| 7777久久亚洲中文字幕蜜桃| 国产成人无码av片在线观看不卡 | 精品亚洲欧美无人区乱码| 亚洲AV中文无码字幕色最| 国产精品Ⅴ无码大片在线看| 中文字幕在线播放| 中文在线天堂中文| 欧美性大战久久久久xxx| 亚洲乱码日产精品BD在线观看| 无码精品人妻一区二区三区人妻斩| 特级aaaaaaaaa毛片免费视频| 国产露脸精品产三级国产av| 99国产精品久久99久久久| 久久99精品久久久久久hb无码 | 丰满欧美大爆乳性猛交| 欧美激情综合一区二区三区| 青柠影视西瓜视频在线观看| 一本久久综合亚洲鲁鲁五月天| 精品国产一区二区三区久久| 亚洲日韩精品无码专区| 青青河边草免费观看视频免费| 年轻的朋友4 韩剧在线观看| 波多野42部无码喷潮在线| 久久久久久人妻一区二区三区 | 无码人妻丰满熟妇区免费|