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間充質(zhì)干細胞成脂誘導分化試劑盒
點擊次數(shù):72 更新時間:2025-02-08

間充質(zhì)干細胞成脂誘導分化試劑盒

,成脂誘導液

貨號:YJ-MSCYD-004

價格: 1280.0

規(guī)格: 100ml    200ml

產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品為團隊精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細胞成脂誘導分化試劑盒,可增強間充質(zhì)干細胞向成脂細胞分化的能力。

本產(chǎn)品僅用于科研用途,不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

產(chǎn)品組成成分及保存

試劑名稱

體積(100mL規(guī)格/200mL規(guī)格)

保存條件及有效期

誘導分化添加劑

5mL / 10mL

-20℃,1 Year

誘導分化添加劑

0.1mL / 0.2mL

-20℃,1 Year

優(yōu)質(zhì)胎牛血清

10mL / 20mL

-20℃,1 Year

細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

85mL / 170mL

4℃1 Year

油紅O染色液

5mL / 10mL

4避光1 Year

注意

1.為保證產(chǎn)品的有效性,請避免反復凍融。

2.配制好的誘導培養(yǎng)基保存于2-8℃,有效期為2周,請根據(jù)實驗用量合理配制。

產(chǎn)品使用說明

1. 成脂誘導分化完全培養(yǎng)基的配制

室溫條件下融化各因子及血清。各因子融化后,瞬時離心,使溶液集中于離心管底部。(注意:若因子或血清中有沉淀物,屬正常現(xiàn)象,無須過濾,避免成分丟失。)

根據(jù)實驗用量,于無菌操作臺中配制誘導分化完全培養(yǎng)基,建議每次配制50mL,配制比例見下表:

試劑成分

配制比例

50mL配制體系

誘導分化添加劑

5%

2.5mL

誘導分化添加劑

0.1%

50uL

優(yōu)質(zhì)胎牛血清

10%

5mL

細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

85%

42.5mL

2. 成脂誘導分化實驗步驟

建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細胞,將其消化下來,離心收集,使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度,均勻鋪于培養(yǎng)瓶/板中,置于37℃5%CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(細胞接種詳情參考表二

培養(yǎng)器皿

底面積

細胞量

培養(yǎng)液體積

24孔培養(yǎng)板

2cm/

2×105cell/

1mL/

12孔培養(yǎng)板

4.5cm/

4.5×105cell/

2mL/

6孔培養(yǎng)板

9.6cm/

9.6×105cell/

2mL/

T25培養(yǎng)瓶

25cm

25×105cell

5mL

6cm培養(yǎng)皿

21cm

21×105cell

5mL

10cm培養(yǎng)皿

55cm

55×105cell

10mL

表二

待細胞匯合度達80%~100%時,即可進行誘導分化。

小心吸棄細胞培養(yǎng)上清,沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養(yǎng)基,置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(注意:完全培養(yǎng)基加入細胞前需提前置于37℃預熱。

2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養(yǎng)基。換液時,若細胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色,是由于細胞量較大,培養(yǎng)基消耗較快導致的,請及時縮短換液周期。(注意:完全培養(yǎng)基加入前需提前置于37℃預熱。

細胞誘導3周后,即可進行油紅O染色鑒定。

3. 油紅染色分析

細胞誘導分化結(jié)束后,小心吸棄細胞培養(yǎng)上清,1×PBS潤洗1~2次。加入適量細胞固定液,室溫固定30 min。(細胞固定液為4%中性甲醛溶液等,體積參考表二

配制油紅O工作液:油紅O貯存液與蒸餾水按照32配制,(例:油紅O貯存液3mL,蒸餾水2mL),混勻。使用濾紙過濾,收集濾液,即為油紅O工作液。(注意:成脂細胞內(nèi)的油滴極易脫落,操作時須謹慎。

細胞固定完成后,吸棄細胞固定液,1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入適量油紅O工作液,室溫染色30min。(注意:油紅O工作液底部可能會有沉淀,吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀,PBS洗去即可。)

吸出染色液,PBS潤洗,去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果。細胞內(nèi)油滴著色,呈紅色。(注意:油紅O工作液不可重復使用,不建議回收。

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實驗技術(shù)服務(wù):



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