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豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To

Porcine Circovirus Type 2 Antibody Test Kit

（PCV Ab）,ELISA

【規(guī)格】

96T×2/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬圓環(huán)病毒抗體?？捎糜谠u估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查、豬群豬圓環(huán)病毒疫苗免疫狀況分析。但試劑盒所測結(jié)果不能用于作為區(qū)分免疫抗體和感染抗體的指標(biāo)，若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫狀況及其他診斷方法綜合進(jìn)行分析。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，由包被有高純度的豬圓環(huán)病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PCV-Ab結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PCV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PCV-Ab的量成正比，當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后，經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標(biāo)儀，雙波長450/630nm濾光片

2．精確的微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10ul，200ul）

7．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存。

2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫30min，可以獲得ZUI佳結(jié)果。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（加入樣本后溶液顏色會有變化），稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。

 3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍，即可使用。

【檢驗(yàn)方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時，設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗(yàn)）。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，無需靜置，直接甩出，洗滌3次，ZUI后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。

4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。

5．溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.1；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計(jì)算時按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值；

當(dāng)樣本的S/P≥0. 2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性；

樣本中抗體相對水平——效價(jià)（ET），其與S/P的關(guān)系如下：

lg（ET的倒數(shù)）= 1.0267x + 0.6884

x=S/P值。

此效價(jià)是根據(jù)實(shí)驗(yàn)室目前對PCV檢測方法和免疫的抗體反應(yīng)兩方面綜合而定；在免疫時效檢測和記錄有代表性樣本的抗體效價(jià)是對豬群的免疫狀況的ZUI好評價(jià)，得出的豬群狀況可對免疫全程中抗體滴度的分布和變化進(jìn)行分析。

若進(jìn)行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果，該軟件可登陸本公司網(wǎng)站下載。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1．嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導(dǎo)致假陽性；有血脂樣沉淀或長菌的樣本可能導(dǎo)致假陰性。

2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別豬只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性。

3．陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時需結(jié)合其他診斷方法和臨床資料進(jìn)行分析。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1．特異性：以本品檢測參比血清，符合率達(dá)*。

2．靈敏度：本試劑盒檢測方法的靈敏度ZUI高可達(dá)1：5120。

3．重復(fù)性：不同批次間CV（%）不高于8%。

4．穩(wěn)定性：試劑盒在2℃～8℃放置6個月或37℃放置3天，測定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。

【注意事項(xiàng)】

1．本試劑盒僅供研究使用。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用。

3．使用試劑盒之前，一定要仔細(xì)閱讀說明書。

4．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

6．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。

7．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

8．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

9．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

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